如何選擇合適的酶標板?
酶標板種類(lèi)繁多,大家往往不知道該怎么選擇?如何選擇?今天,小編跟大家一起來(lái)學(xué)習下酶標板的選擇技巧!
一:根據酶標板底部的不同,可以分為平底、U型底、V型底
平底的折射率低,適于在酶標儀檢測;U型底的酶標板折射率較高,方便加樣、吸樣、混勻等操作,可以不用放在酶標儀上,直接通過(guò)目測觀(guān)察顏色變化情況,從而判定有無(wú)相應的免疫反應。V底的酶標板可以的吸取樣品。
二:根據酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同,分為高結合力、中結合力和氨基化
高結合力:表面經(jīng)處理后,其蛋白結合能力大大增強,可達300~400ngIgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類(lèi)酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應??乖蚩贵w包被后,以非離子去污劑無(wú)法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。
中結合力:經(jīng)表面疏水鍵被動(dòng)與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類(lèi)酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異性交叉反應。該類(lèi)板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
氨基化:經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類(lèi)酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過(guò)離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過(guò)其它交聯(lián)劑共價(jià)結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類(lèi)板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無(wú)法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價(jià)的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。
三:根據顏色分為透明、黑色、白色
透明的是zui常用的,用于zui一般的酶聯(lián)免疫實(shí)驗。相對于透明的的板子,還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子,一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標板自身會(huì )有光吸收,所以它的信號相對于白色的板子要低很多,因此一般用于檢測較強的光,如熒光檢測。而白色的酶標板就用于較弱的光檢測,常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標板還可以消弱非特異反應帶來(lái)的問(wèn)題。有些客戶(hù)會(huì )問(wèn),用一般的酶標板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測,回答是不可以的,因為一般從化學(xué)發(fā)光反應中發(fā)射出的光是各向同性的,也就是說(shuō)各個(gè)方向上同等發(fā)射出來(lái)的。如果用透明的板子,光不僅會(huì )從垂直方向發(fā)散,還從水平方向發(fā)散出來(lái)。很容易的就會(huì )通過(guò)各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。這樣的話(huà),光較強時(shí)相鄰孔之間的影響就會(huì )很大,因此不能用透明的酶標板來(lái)進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗。
當然,現在的酶標板還有可拆卸和不可拆卸供客戶(hù)選擇。